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士锋生物蛋白质醋酸纤维薄膜电泳技术
点击次数:635 更新时间:2013-10-09

  一、原理:蛋白质分子在一定的PH条件下,由于基团解离而带有一定的电荷,在含有缓冲液的醋酸纤维薄膜上,受电场作用而以一定的速度向一定的方向移动。不同的蛋白质分子,由于所带的电荷不同,移动的方向或速度不同,从而达到分离。

二、材料与试剂:电泳仪、醋酸纤维薄膜、PH8.6缓冲液(称取10.30g1.84g,溶于1000ml蒸馏水中,或者称取10.3g钠,加1M盐酸8ml,加蒸馏水至1000ml)、染色液(氨基黑10B1g溶于10ml冰醋酸与90ml甲醇的混合液中)、洗涤液(冰醋酸10ml加甲醇90ml,或者甲醇50ml,冰醋酸10ml,加蒸馏水40ml)、透明液(溶液,或用苯甲醇(折光率1.54),(折光率1.54)等溶液)、微量注射器、蛋白质样品液

 

三、操作方法

 

1、醋酸纤维薄膜的准备:将醋酸纤维薄膜切成10×2.5cm的膜条,浸于缓冲液中约30min,充分浸透至无白点,取出用滤纸吸去多余的缓冲液。

 

2、点样:用微量注射器将5ul蛋白质样品点在薄膜条。

 

3、电泳:将薄膜条置于电泳仪的支架上,拉直膜条,两端与滤纸条相接,将滤纸浸入到缓冲溶液中,缓冲液两槽应在同一水平面上,加盖密封,平衡10min。接通电源,以10-25V/cm的电场强度电泳0.5-1h。

 

4、显色:电泳完毕后,取出滤纸条在氨基黑染色液中染色5-10min,然后用漂洗液洗4-5次,直至区带清晰为止。

 
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