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士锋生物天然免疫功能实验测定
点击次数:770 更新时间:2013-11-25

天然免疫是特异性免疫的基础,并参与和影响特异性免疫,因此检测机体天然免疫功能的状态,是评价机体免疫功能的重要组成部分。
一、中性粒细胞吞噬功能检测
中性粒细胞吞噬细菌的现象称为小吞噬现象,可以通过体外实验观察其吞噬细菌的情况并测定吞噬功能。
【材料】白色葡萄球菌18小时肉汤培养物、抗凝人血、小试管、玻片、吸管、毛细吸管、瑞氏染色液。
【方法】
1、用酒精棉球消毒耳垂后,取血4滴(约0.2ml),收集于肝素(50u/ml)抗凝管中,混匀。
2、加入白色葡萄球菌18小时肉汤培养物2滴(约0.1ml,12亿菌/ml)。
3、充分混匀,置37℃孵育10分钟后取出。
4、取—滴全血-白色葡萄球菌混合液置于洁净的载玻片上,推成薄血片,空气中自然干燥。
5、瑞氏染色:瑞氏染液数滴覆盖血膜,染1分钟,再加等量pH6.8 PBS与染液混合,染10~15分钟,注意勿使染液干涸。用蒸馏水冲洗,冲洗时平持玻片,在一端加水,使染料“漂”走。空气中自然干燥或滤纸印干。
6、油镜观察,可见中性粒细胞吞噬葡萄球菌。如染色正确,可见细胞核及被吞噬细菌染成紫色,而中性粒细胞的细胞浆则为淡红色。
【结果】观察100个中性粒细胞,分别记录吞噬细菌的中性粒细胞数和每个中性粒细胞吞入的细菌数。计算公式为:

二、巨噬细胞吞噬功能检测
巨噬细胞吞噬异物的现象又称为大吞噬现象。此试验通过检测巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用,了解巨噬细胞的吞噬功能。
【材料】小白鼠、灭菌肉汤培养基、1%鸡红细胞悬液、Hanks液、肝素、瑞氏染液。
【方法】
1、试验前一天,于小白鼠腹腔内注射灭菌肉汤培养基1ml。
2、试验当天,小白鼠腹腔内注入1%鸡红细胞悬液1ml,轻揉腹部,使鸡红细胞分散。
3、30分钟后,腹腔内注入Hanks液2ml,轻揉腹部,然后吸取腹腔液注入盛有1ml Hanks液(内含肝素10单位)试管中,37℃静置30分钟,1500转/分,离心10分钟。
4、取沉淀物作涂片,自然干燥,瑞氏染色,镜检。
【结果】
1、吞噬率(%):指每100个巨噬细胞中吞有鸡红细胞的巨噬细胞数。
2、吞噬指数:100个巨噬细胞吞噬的鸡红细胞总数除以100,即得吞噬指数,即每个巨噬细胞吞噬鸡红细胞的平均数。
计算公式同上。
【附录】
1、瑞氏染液配制:
称取瑞氏染料0.1克,研磨于60ml甲醇中,过滤,贮褐色瓶中备用。
2、鸡红细胞悬液的制备:
用注射器由鸡心内取血数毫升,加于含枸椽酸钠溶液的试管中,摇匀,离心沉淀,沉淀的红细胞用Hanks液洗涤三次,配成1%浓度即成。

 
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