概述
临床上的各种类型的免疫缺陷、自身免疫病以及肿瘤等疾病均可出现淋巴细胞或淋巴亚群的数量和功能的变化。因此用体外方法对机体具有免疫反应的外周血淋巴细胞及其亚群的数目或比例以及它们所显示的功能的强弱进行检测,是判断机体细胞免疫水平的一种重要手段。这对于临床认识疾病、探讨其发病机制、观察病情变化、判断预后、考核疗效和防治疾病等方面均有重要意义。
*节 免疫细胞的分离
用体外方法对机体各种具有免疫反应的细胞分别作鉴定、计数和功能测定,是观察机体免疫状态的一种重要手段。为此,须将各种参与免疫反应的细胞从血液中分离出来。参与免疫的细胞主要包括:淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等。
一、白细胞的分离
血液中红细胞与白细胞比例约为600~1000:1,两者的比重不同其沉降速度也不同,通常用两种方法加以分离。
1、自然沉降法 外周血, 抗凝,静置约一小时血液分为三层,上层为血浆,底层为红细胞,紧贴红细胞层上面的灰白层为WBC,轻轻吸取此层即可得到富含WBC悬液,低渗破坏RBC,洗涤即可。
2、聚合物加速沉淀法
常利用高分子量的聚合物如明胶、右旋糖酐等,将红细胞快速沉降,从而分离出白细胞。本法的细胞获得率比自然沉降法高。
二、外周血单个核细胞的分离
人血液中各种细胞的密度如下:
红细胞:1.093
白细胞:1.092
淋巴细胞和单核细胞:1.075~1.090
血小板:1.030~1.035
单个核细胞包括:淋巴细胞和单核细胞。
分离血细胞常用的分离剂为:Ficoll和Percoll分离剂
1、 Ficoll分层液
主要用于分离外周血中的单个核细胞,是一种单次密度梯度离心分离法。其主要成分为聚蔗糖(商品名为Ficoll )其密度为1.020。可将血液分成四层,从上到下依次是:血浆、单个核细胞、粒细胞和红细胞。
2、Percoll分层液
是一种连续密度梯度离心分离法,其主要成分为:硅胶颗粒,其原液密度为:1.135。可将血液分成四层,从上到下依次是:死亡细胞和血小板、单核细胞、淋巴细胞、粒细胞和红细胞。