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士锋生物液相色谱常见故障的断定及解决常见故障的断定与解决方法
点击次数:1084 更新时间:2014-04-17

诊状可能的原因解决方法 

(一)保留时间变化 
1.柱温变化柱恒温,必要时需配置恒温箱 
2.等度与梯度间未能充分平衡至少用10倍柱体积的流动相平衡柱 
3.缓冲液容量不够用》25mmol/L的缓冲液 
4.柱污染每天冲洗柱 
5.柱内条件变化稳定进样条件,调节流动相 
6.柱快达到寿命采用保护柱 

(二)保留时间缩短 
1.流速增加检查泵,重新设定流速 
2.样品超载降低样品量 
3.键合相流失流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向 
4.流动相组成变化防止流动相蒸发或沉淀 
5.温度增加柱恒温 

(三)保留时间延长 
1.流速下降管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡 
2.硅胶柱上活性点变化用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱 
3.键合相流失同前(二)3 
4.流动相组成变化同前(二)4 
5.温度降低同前(二)5 

(四)出现肩峰或分叉 
1.样品体积过大用流动相配样,总的样品体积小于*峰的15% 
2.样品溶剂过强采用较弱的样品溶剂 
3.柱塌陷或形成短路通道更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件 
4.柱内烧结不锈钢失效更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品 
5.进样器损坏更换进样器转子 

(五)鬼峰 
1.进样阀残余峰每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗 
2.样品中未知物处理样品 
3.柱未平衡重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱) 
4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱)每天新配,用抗氧化剂 
5.水污染(反相)通过变化平衡时间检查水质量,用hplc级的水 
(六)基线噪声 
1.气泡(尖锐峰)流动相脱气,加柱后背压 
2.污染(随机噪声)清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂 
3.检测器灯连续噪声更换氘灯 
4.电干扰(偶然噪声)采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等) 
5.检测器中有气泡流动相脱气,加柱后背压 

(七)峰拖尾 
1.柱超载降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相 
2.峰干扰清洁样品,调整流动相 
3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品 
4.同前(四)4同前(四)4 
5.同前(四)35.同前(四)3 
6.死体积或柱外体积过大连接点降至zui低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管 
7.柱效下降用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱 

(八)峰展宽 
1.进样体积过大同(四)1 
2.在进样阀中造成峰扩展进样前后排出气泡以降低扩散 
3.数据系统采样速率太慢设定速率应是每峰大于10点 
4.检测器时间常数过大设定时间常数为感兴趣*峰半宽的10% 
5.流动相粘度过高增加柱温,采用低粘度流动相 
6.检测池体积过大用小体积池,卸下热交换器 
7.保留时间过长等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱 
8.柱外体积过大将连接管径和连接管长度降至zui小 
9.样品过载进小浓度小体积样品

 
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