销售热线:13127537090
 首页 公司简介 新闻中心 产品展示 解决方案 技术资料 客户留言 联系我们 招聘中心
 
公司名称: 上海士锋生物科技有限公司
电  话: 021-56640936
传  真: 021-33250231
联 系 人: 赵先生
手  机: 13127537090
详细地址: 上海市宝山区锦乐路
邮  编: 200064
邮  箱: 1954697015@qq.com
公司网站: www.shifengsw.com

  无标题文档
产品搜索:
 
士锋生物琼脂糖凝胶电泳检测DNA
点击次数:1045 更新时间:2014-04-23

原理: 琼脂糖是从海藻中提取出来的一种线状高聚物,可作为电泳支持物,适用于分离大小范围在0.2-50kb的DNA片段。DNA分子的迁移率与分子量的对数值成反比关系。观察其迁移距离,与标准DNA片段进行对照,就可获知该样品分子量大小。在质粒抽提过程中,由于各种因素的影响,使质粒dna呈现超螺旋的共价闭合环状、开环状分子、线状分子三种不同的构型,这三种分子有不同的迁移率。在一般情况下,超螺旋型迁移速度zui快,其次为线状分子,zui慢的为开环状分子。用荧光染料溴化乙锭(ethidium bromide, EB )进行检测,溴化乙锭嵌入碱基对之间形成荧光络合物,在紫外线激发下发出红色荧光。

仪器与主要试剂:
仪器:
1) 电泳仪
2) 水平电泳槽
3) 紫外检测仪
主要试剂:
1) 提取的质粒DNA
2) 5×TBE:54gTris; 27.5g硼酸; EDTA (0.5mol/L, pH 8.0) 20ml, 加水至1L,用前稀释10倍
3) 溴化乙锭(EB):10mg/ml溶液
4) 溴酚蓝

实验方法:
1) 称取1g琼脂糖于100ml 0.5×TBE中,加热溶解,冷却至65℃左右再加入终浓度为0.5%-1.0%的EB。
2) 电泳胶模两端用透明胶带封固,梳子至于适当位置,将冷却至65℃左右的琼脂糖溶液慢慢倒在胶模上,厚度约3㎜。静置,待胶凝固后揭去胶模两端的透明胶带,放入电泳槽内,倒入适量电泳缓冲液(一般液面高出凝胶1㎝),小心拔出梳子。
3) 将5μg提取的质粒DNA样品,与等体积溴酚蓝指示剂混匀,加入凝胶点样孔内,防止产生气泡和样品溢出。
4) 将电泳槽通电,80V恒压电泳30分钟。
5) 电泳完毕,关掉电泳仪,倒去电泳槽中的电泳缓冲液,小心取出凝胶置于紫外灯下观察结果,质粒DNA条带发出红色荧光。

注意事项:
1) 防止紫外线对人皮肤及眼睛的损伤,避免直接照射皮肤与眼睛。
2) EB是强诱变剂,有致癌性,操作时要带手套,防止污染。所有含有EB的溶液在弃置前应当进行净化处理。

 
上海士锋生物科技有限公司 2008版权所有 电话:021-56640936 传真:021-33250231 联系人:赵先生 地址:上海市宝山区锦乐路
ICP备:沪ICP备12022871号-2 管理登陆 技术支持:环保在线 GoogleSitemap
专业提供:进口elisa试剂盒,标准品,培养基,生物试剂,化工产品。
021-56640936
13127537090
021-33250231
1954697015@qq.com

环保在线

推荐收藏该企业网站