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琥珀酸脱氢酶的作用及竞争性抑制的观察
点击次数:2569 更新时间:2014-05-16

琥珀酸脱氢酶是三羧酸循环中的一个重要的酶,测定细胞中有无这种酶可以初步鉴定三羧酸循环途径是否存在。

琥珀酸脱氢酶可使其底物脱氢,产生的氢可通过一系列传递体zui后递给氧而生成水。

在缺氧的情况下,若有适当的受氢体也可显示出脱氢酶的作用。如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的情况下,可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸,脱下之氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白。

这样,便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用。

琥珀酸脱氢酶的作用及竞争性抑制的观察
丙二酸的化学结构与琥珀酸相似,它能与琥珀酸竞争而和琥珀酸脱氢酶结合。若琥珀酸脱氢酶已与丙二酸结合,则不能再催化琥珀酸脱氢,这种现象称为竞争性抑制。如相对地增加琥珀酸的浓度,则可减轻丙二酸的抑制作用。 
(二)试 剂 
1.1.5%琥珀酸钠溶液:称取琥珀酸钠1.5g,用蒸馏水溶解并稀释至100ml。如无琥珀酸钠可用琥珀酸配成水溶液后,以氢氧化钠溶液中和至pH7~8。 
2.1%丙二酸钠溶液:称取丙二酸钠1g,用蒸馏水溶解并稀释至100ml。 
3.0.02%甲烯蓝溶液。 
4.1/15mol/LNa2HPO4溶液:取Na2HPO4 · 2H2O 11.8g,用蒸馏水溶解并稀释至1 000ml。 
5.液体石蜡。 
(三)操 作 
1.猪心脏制备液:称取新鲜猪心1.5~2.0g放组织捣碎机中,加入等体积的石英砂及1/15mol/LNa2HPO4溶液3~4ml,捣碎成浆,再加入6~7ml1/15mol/LNa2HPO4溶液,放置1小时,不时摇动,离心取上清液备用。 
2.取4支试管,编号并按下表操作:

3.各管溶液混匀后,每管各加液体石蜡一薄层(约5~10滴)。为什么?
4.各管置于37℃水浴中,半小时内观察各管颜色变化,比较其速度并说明原因。然后将第1管用力摇动,观察其有何变化?为什么?

 
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