如何进行新生牛血清的筛选-上海士锋生物科技有限公司

实验原理
牛血清是细胞培养基中的中药成份之一。在培养基中加入适量血清（10%），首先可以补充细胞生长所需的生长因子、激素、帖附因子等，其次它具有解毒作用，能解除脂肪酸、重金属和某些蛋白酶的毒性；再次，它还能中止的作用，并保护细胞免受机械损伤等。但是血清成分复杂，不同来源、不同批号生产的血清对细胞生长作用的差异较大。血清的保存期只有一年，不同存放时期的血清的效力也不同。所以，当新购得的血清或要在开始一个重大试验的时候，应首行牛血清的筛选。
筛选时，通常选用正常的二倍体细胞和不太好养的肿瘤细胞，也可以使正要准备培养的细胞。另外，用已知血清作对照。

仪器、材料和试剂
仪器
CO2 培养箱，超净工作台，微量加样器，灭菌锅
材料
96孔培养板，刻度吸管，移液管，试管，吸管，废液缸，血球计数板，HeLa细胞，Mel细胞
试剂
DMEM，不同批号的血清，，双抗

实验步骤
1.取HeLa细胞和Mel细胞（本来应该取正常的二倍体细胞和不太好养的肿瘤细胞，但是实验室条件有限，本组做HeLa细胞），消化后，用无血清培养基（事先加双抗）吹打成细胞悬液（避免以前血清的干扰）。计数。
2.取4000个左右的HeLa细胞加入到每行的*孔（在加之前要震荡培养基）。本实验经计数后应加11μL细胞。
3.在A和H行中*孔加入89μL含标准血清(2004.12)的培养基。（对照组）
4.在A和H行中每一孔中加入100μL含标准血清的培养基。
5.将*孔中的液体吸100μL至第二孔，从第二孔吸100μL至第三孔，然后相同。zui后的100μL弃掉。这样就形成了从*个孔到zui后一个孔的细胞梯度从大约2056，1028等至1个。（要吹细均匀）
6.每个孔再补加100μL含标准血清的培养基。这可以保证孔中的营养物质。
7.在B行采取同样的方法。不同的是用含有需筛选的批号为011217血清代替标准血清。
8.在C至G行采用同样的方法。血清批号分别是030224，040528，040830，041012，041016。
9.将96孔培养板放入CO2 培养箱37℃培养一周。
10. 培养结束后，观察细胞生长的情况。比较在同一细胞浓度下的不同学清对细胞生长的影响。在同一细胞浓度下细胞生长数zui多的培养基所含有的血清即可作为被选择的血清样品。

实验结果
从第五行开始计数，结果见下表
集落数第5行
第6行

第7行

第8行

第9行

第10行

第11行

第12行

A
00

实验中，我们可以看出C组细胞的集落数是zui多的（相对于同一列的来说）。C组细胞是用批号为030224的血清来培养的，这说明030224号血清更能促进HeLa细胞的生长。在别的同学所作的实验中，是E组的Mel细胞生长的，这说明040830更能促进Mel细胞的生长。由此看出，不同细胞是适应不同的血清的，不能一概而论。A组和H组是对照组，但并没有长出细胞集落。这个情况在全班中普遍存在，这可能是对照组血清有问题或者做实验时根本没有加血清。

实验讨论
牛血清是细胞培养基中重要的培养成份之一，对细胞生长有广泛影响。在细胞培养时，我们通常会加入10%的血清。血清的质量对细胞培养的成功至关重要。一般说来，牛血清包括以下成分：生长因子（如激素，白细胞介素等），他们可以促进细胞生长；贴附因子，他们可以促进细胞的贴壁，往往只有细胞贴壁才能增值（悬浮培养的细胞除外）；蛋白质（如血清白蛋白，球蛋白等），既可以作为营养物质，又可以中止的作用；还有很多成分不明的物质。血清还可以起到解毒作用，如脂肪酸、重金属和某些蛋白酶的毒性。血清还可以是细胞免受机械损伤。
不同厂家，不同批次生产的血清质量不同，对细胞生长的作用不同，所以在拿到一个新血清或者开始重大科研实验时，要进行新生牛血清的筛选。有些血清可能有支原体污染；不同血清对不同细胞的促进作用不同；血清放置一段时间后，营养价值会降低，所以有必要进行新生牛血清的筛选。新生牛血清zui适宜被试细胞生长的血清可以用于的实验。
本实验中是一次加上所有的细胞的。这样使得每一排的细胞总数的差异减到zui小，从而使得系统误差减小；而且，这种方法方便快捷，效率也有所提高；试验结果显示，我们的这种方法却是较为*。

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