1、将高压的PBS洗涤细胞瓶两次，弃PBS，倒置纸巾上吸干。

2、加入2 ml裂解液10×permeabilization buffer 2 ml。

3、放入冰箱里裂解，平放，拧紧盖子，置摇床半小时，200 转/min。

4、收集裂解液至1.5 ml EP管，分两管，12000 rpm，4 ℃离心，5 min使之沉淀。

5、取上清液，把两管合为一管，超滤，5000 g，4 ℃离心到100-120微升后，倒置300-500 rpm。

6、取上清液分装至-20/-80度保存。