二、实验安排

第1次   菌体超声破壁、离心、包涵体复性、 装离子交换柱

第2次   测酶活、定蛋白离子交换层析  层析样品进行浓缩、透析 

第3次    浓缩、透析前、后样品测活、定蛋白  装分子筛柱   

第4次    分子筛层析，并对收集样品进行测活、定蛋白等 

第5次    对分离纯化各样品进行蛋白电泳分析，并绘出分离纯化表 

三、实验操作    

第1次：  菌体超声破壁、离心、包涵体复性、装离子交换柱  

实验顺序：超声破壁→离心→装离子交换柱→平衡→包涵体复性  

掌握要点：破壁原理 

装离子交换柱方法  

包涵体复性原理及方法

第2 次：测酶活、定蛋白、  离子交换层析分析 、 层析样品进行浓缩、透析 

实验顺序：测酶活→上柱→梯度洗脱→定蛋白→紫外吸收测蛋白峰→酶活曲线测定→收集样品→ 浓缩 →透析 涉及单元实验：测酶活、定蛋白、  离子交换层析、浓缩、透析  

掌握要点：碱性磷酸单酯酶测活原理 

          紫外吸收法绘蛋白浓度曲线方法 

          离子交换层析原理及方法 

          浓缩及透析常用方法

第3次：浓缩、透析前、后样品测活、定蛋白、装分子筛柱  

实验顺序：浓缩透析前、后样品测活→考马斯亮蓝法定蛋白→装分子筛柱→平衡  

涉及单元实验：测活、定蛋白、装分子筛柱  

掌握要点：考马斯亮蓝法测蛋白浓度方法  

                  装分子筛柱方法 

第4次：分子筛层析，并对收集样品进行分析  

实验顺序：测活样品进行分子筛层析→紫外吸收测蛋白峰--酶活曲线测定→考马斯亮蓝法定蛋白  

涉及单元实验：破壁、离心、分子筛层析、复性 

掌握要点：分子筛层析原理  

                  对分离纯化各样品计算比活

第5次：对分离纯化各样品进行蛋白电泳分析， 并绘出分离纯化表 

 实验顺序：蛋白电泳，同时进行数据分析 

涉及单元实验：蛋白电泳

掌握要点：掌握蛋白电泳方法 

                  了解分离纯化样品纯度鉴定的各种方法 

                  绘制酶的分离纯化表