1.概 述 
mRNA差异显示技术（mRNA differetial display）是一种快速有效的克隆差异性表达基因的方法。 

方法建立：1992年 Liang P和Pardee应用DD技术对比人类乳腺癌细胞与正常细胞所表达的mRNA，以此来克隆癌细胞所*的基因 

目前已应用于个各领域： 
农业、植物 
动物 
医学 
? 胚胎发育 
? 遗传病 
? 药物 
? 肿瘤 

2.mRNA差异显示原理 
是分离差异表达基因的一个重要方法。人类大约含有三万个不同的基因。在不同的单个细胞中只有10％的基因处于表达状态。 
生物体在不同的生理，病理状态下，基因的表达水平不同。 
生命过程中选择性表达的基因主要有：发育与分化、体内平衡、对攻击的应答、细胞周期调节、老化和程序性细胞死亡等。 
差异显示获得的只是某个基因的片段，而不是直接获得全长cDNA克隆。 

3.基本程序 
选择表型特性差异显著对象 
展示mRNA的差异 
基因差异 
克隆与表型差异高度相关的新基因 
4.技术 
? 基本技术 
逆转录（ RT ） 
聚合酶链反应（PCR） 
凝胶电泳 
5.RT-PCR 
? 锚定引物 T12-MN，含有12个T可以结合于mRNA 3`端 poly（A）尾，M为A、C、G 3种碱基之一，N为A、T、C、G 4种碱基之一。 
? 荧光锚定引物 ，引物5`端加入T7 RNA多聚酶启动子并带有荧光分子 

----------- AAAAAAAAAA –3` mRNA 

------------XAAAAAAAAAAA–3` 1/3 mRNA 
MTTTTTTTTTTTT（12T） Prime 

---------YXAAAAAAAAAAAAA –3` 1/12 mRNA 
NMTTTTTTTTTTTT（12T）Anchor Prime 

?荧光锚定引物： 
NMTTTTTTTTTTTT-T7 RNA多聚酶启动子-荧光分子 
（Genomyx company） 

因此共有12种锚定引物 
?同位素标记锚定引物 

?随机引物 （Arbitrary Prime） 
可以随机地与cDNA不同位置多个位点结合，扩增出不同长度的cDNA片段混合物。 
共20种随机引物，随机引物-M13 
?随机和锚定引物的多种组合可以展示10000-15000种mRNA