一、细胞的裂解 
单层细胞的裂解 
悬浮培养的细胞或组织单细胞悬液的裂解 
a．单层细胞的裂解 
a）吸出培养液，以7ml用冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲盐溶液PBS冲洗细胞培养皿内的单层细胞，重复1次，将平板置于冰上直至所有单层细胞冲洗完毕。也可将平板放在一块铝板上，再将铝板置于冰盘上。 
b）直径为90mm的培养皿需加0.5ml RNA提取缓冲液， 并使之遍布整个平板的表面。 
RNA提取缓冲注液 
0.14mol/L NaCL 
1.5mmol/L MgCL2 
10mmol/L Tris.CL(pH8.6) 
0.5％NP-40 
1mmol/L二硫苏糖醇（DTT） 
100单位/ml胎盘rna酶抑制剂或20mmol/L氧钒核糖核苷复合物 
c）加0.5ml蛋白酶消化缓冲液，用刮棒混匀粘稠状裂解物并将其刮到平板的边缘。 
蛋白酶消化缓冲液 
0.2mol/L Tris.Cl(pH8.0) 
25mmol/L EDTA(pH8.0) 
0.3mol/L NaCl 
2％ SDS 
d）用装有21号针头的皮下注射器抽吸细胞裂解物，再将其注入聚丙烯管内。重复3－4次，剪切DNA。 
c）加蛋白酶K至终浓度为200μg/ml，充分混匀后置于37℃温育30分钟。 
蛋白酶K以贮存液的形式保存，贮存液为20mg/ml 蛋白K溶液。 
b．悬浮培养的细胞或组织单细胞悬液的裂解 
a）于4℃以2000g离心5分钟收集细胞，以10倍体积用冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲液悬沉淀，洗涤细胞3次，每次均用大口径的吸管轻轻吹打细胞沉淀，使其*分散。 
b）估计细胞沉淀的体积，用10-20倍体积的RNA提取缓冲液重悬之。 
c）加入与步骤b）所加RNA提取缓冲液体相同的蛋白酶消化缓冲液，用振荡器迅速混匀。用装有21号针头的皮下注射器抽吸细胞裂解物，再将其注入聚丙烯管内。重复3－4次，剪切DNA。 
d）加蛋白酶K至终浓度为200μg/ml，充分混匀后置于37℃温育30分钟。蛋白酶K以贮存的形式保存，贮存液为20μg/ml蛋白酶K水溶液。 
二、提取步骤 
1）用等体积酚：仿抽提1次，以去除蛋白质。