EGY48  Chemically Competent Cell 产品说明书

产品规格

EGY48：                      10×100μl            保存条件：-80℃

PGBKT7（control vector）：10ng/μl    10μl            保存条件：  4℃

Carrier DNA：             5ug/μl  100 μl            保存条件：  4℃

PEG/liAC：                        5 ml            保存条件：  4℃

基因型

 MATα, ura3, his3, trp1, LexA_{op (x6)}-LEU2

产品说明

 EGY48感受态细胞是实验室常用酵母双杂用菌株，MATα型，可转化质粒或mating操作。Transformation  marker为: his3, trp1, ura3 ，报告基因为：LEU2 。经PGBKT7质粒检测转化效率为10⁴cfu/μg DNA。

操作方法

1. 取100 μl冰上融化的EGY48感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒1-5ug，Carrier DNA（95-100度5min,快速冰浴，重复一次）10 ul ，PEG/liAC  500ul并吸打几次混匀，30度水浴30 分钟（15 min时翻转6-8次混匀）。

2. 将管放42度水浴15min  （7.5 min时翻转6-8次混匀）。  

3. 5000 rpm 离心 40s 弃上清，ddH2O 400ul 重悬，离心 30s 弃上清。                      

4. ddH2O 50ul重悬，涂板。

5. 28-30度 ，培养48-96小时。

注意事项

1. 感受态细胞在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。