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β-Gal染色试剂盒 (组织专用) 使用说明书
点击次数:1546 更新时间:2021-10-08

β-Gal染色试剂盒 (组织专用)

货号:R0757

规格:100T

保存:-20,避光,12 个月。

简介: β

β-Gal染色试剂盒(组织专用) (β-Galactosidase Staining Kit)是一种基于衰老时SA-β-Gal (senescence-associated β-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力,在不能分裂后就进入衰老状态。此时细胞仍然是存活的,但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。

           β-Gal染色试剂盒(组织专用) X-Gal为底物,在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物,光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。本试剂盒仅染色衰老细胞,对衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞等不会染色。对于组织切片或组织块应采用冰冻切片,可以检测的样品数量视样品的大小而定,对于普通的切片按每片1ml可以检测100个样品

组成:

名称

规格

保存条件

试剂(A): β-Gal Fixative

100ml

4℃

试剂(B): X-Gal Solution

5ml

-20

试剂(C): β-Gal Staining A Solution

1ml

4℃

试剂(D): β-Gal Staining B Solution

1ml

4℃

试剂(E): β-Gal Staining C Solution

100ml

4℃

                                                                  

自备材料:

1、PBSHBSS  

2、2、冷冻切片 

3、3、显微镜  

操作步骤(仅供参考): 

1. 对于组织切片或非常小的组织块,加入适当体积的β-Gal Fixative,染色固定液,以充分盖住组织为宜,室温固定不少于10分钟。对于小的组织块,固定时间应该适当延长。
2. PBS洗涤组织3次,每次不少于5分钟。对于组织块,时间还要适当延长。
3. 吸除PBS,每孔加入1毫升染色工作液。染色工作液的配制参照下图。
4. 37℃孵育20分钟至2小时,或更长时间,直至部分细胞的颜色变蓝。如果孵育时间较长,可以用parafilm或保鲜膜封住放置组织的容器,以防止蒸发。
5. 吸除染色工作液,用PBS洗涤组织3次,每次不少于5分钟。对于组织块,时间还要相应延长。
6. 普通光学显微镜下观察。如不能及时观察,可以去除染色工作液,加入2毫升PBS4℃可以保存数天。

方法参考下表比例:

名称

体积

β-Gal Staining A Solution

10ul

β-Gal Staining B Solution

10ul

β-Gal Staining C Solution

930ul

X-Gal Solution

50ul

说明:对于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的简单的判定方法是:聚丙烯容器可以高温高压灭菌;而聚苯乙烯容器不适合高温高压灭菌,一旦高温高压处理就会严重变形。437℃孵育2h至过夜,直至样品显蓝色。可以用parafilm或保鲜膜封住防止蒸发,把整个切片浸泡在染色工作液中,应注意37℃孵育不能在二氧化碳培养箱中进行。 5、普通光学显微镜下观察。如不能及时观察,加上封片液封片后4℃可以保存较长时间。 

注意事项:

1、 β-GalFixative有一定的腐蚀性和气味,操作时请注意防护。 

2、 β-Gal 染色反应依赖于特定的pH条件,不能在二氧化碳培养箱中进行染色反 应。用于细胞培养的二氧化碳培养箱中较高浓度的二氧化碳会影响染色工作液的pH值,而导致染色失败。 

3、 配制染色工作液时需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器,不宜使用聚苯乙烯 (polystyrene)容器。但染色时可以在聚苯乙烯(polystyrene)容器中进行,例如普通的6孔板就可以用作染色的容器。  

有效期:12个月有效。   

 


 
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