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细胞增殖-毒性(CCK-8)检测试剂盒使用说明书
点击次数:3982 更新时间:2021-11-19

细胞增殖-毒性检测试剂盒

Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

产品编号

产品名称

規格

SP8702-100T

CCK-8细胞增殖-性检测试剂盒

100 孔,1ml

SP8702-500T

CCK-8细胞增殖-性检测试剂盒

500,5x1ml

 

产品简介:

CCK-8试剂盒种基于WST-8的广泛应用于细胞増殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒WST-8是一种类似于MTT化合在电了耦合试剂1-Methoxy PMS存在的情况下可以被还原生成橙黄色水溶性的甲臜(Formazan)细胞増殖越多越快,则颜色越深:细胞毒性越大色越浅。对于同样的细胞.色的深浅和细胞数目呈线性关系

使用方法:

1、 在96孔板中接种细胞悬液(100ul/孔).通常细胞增值实验每孔约2000个细胞.细胞毒性实验每孔约5000个细胞.具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小细胞増殖速度的快慢等因素决定

2、 按照实验需要.进行培养并给予0-10ul特定的药物刺激,处理一段适当的时间(例如: 6.12.24 48 小时)

3、 每扎加入1Oul CCK-8溶液如果起始的培养体枳为200ul,刻需加入2Oul CCK-8溶液,以此类推。可以用加相应量的细胞培基和CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照,若担 心所使用的药物会干扰检测,设置加相应细胞培养液药物CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空口对照。

4、 在细胞培养箱内继续孵育1-4小时,具体时间而以通过预实验确定.实验时可以 0.5、 1、2和4小时后分别用标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的个时间点用于后续实验。

5、 酶标仪测定在450 nm处的吸光值,若无450nm滤光片.可以使用420-480nm的 滤光片。如果样品为高浑浊度的细胞悬液,以使用大于600nm的波长,例如650nm,作 为参考波长进行双波长测定

6、 如果浴要哲时不测定OD值,可以向每孔中加入lOul0.1M HCL溶液或者1% W/V的 SDS溶液,避光保存在室溫24小时内吸光度不会发生变化

实验结果分析:
细胞活力=[0D(加药)-0D(空白)]/ [OD(0加药)-0D(空白)]x 
抑制率=[OD(0加药)-OD(加药)]/ [OD(0加药)-OD(空白)]x
 OD(加药):具有细胞、培养基、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光值
 OD(空白):具有培养基、CCK-8溶液,没有细胞的孔的吸光值
OD(0加药):具有细胞、培养基、CCK-8溶液,没有药物溶液的孔的吸光值
注意事项:
1、使用96孔板进行检测时,如果细胞培养时间较长,请注意蒸发问题。可将96孔板外围一圈加培养基、水或PBS保湿。同时,可以把96孔板置于培养箱内靠近水盘的位置以缓解蒸发。
2、培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同。在正式实验前,建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入CCK-8试剂后的培养时间。
3、铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀,建议铺板过程中注意时常混匀,防止因细胞沉淀造成不均匀。加入CCK-8后请前后左右轻轻晃动培养板数次,使培养基和CCK-8溶液充分混匀。
4、本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,如果待测物质有氧化性或还原性,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基,去掉药物的影响。若药物影响比较小的情况可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
5、加入CCK-8时,如果细胞培养时间较长,培养基颜色或pH值已变化,建议换用新鲜的培养基。
6、用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。
7、本试剂盒系无菌灌装生产。在使用过程中,请在生物安全柜内无菌操作,避免污染。
8、为了您的健康和安全,请穿着实验服并戴一次性手套或乳胶手套操作。
保存方法:
0-5℃避光保存,保存建议-20℃,但不能反复冻融。
0-5℃条件下可保存一年。



 
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