Rosetta 感受态细胞产品说明书

               Rosetta Chemically Competent Cell 产品说明书

产品规格

Rosetta：                               10×100μl

pUC19（control vector）：10pg/μl               10μl

保存条件：-80℃

基因型

F^-ompT hsdS_B(r_B^-m_B^-)gal dcm(DE3) pRARE(argU，argW，ileX，glyT，leuW，proL)(Cam^R)

产品说明

 Rosetta 感受态细胞具有抗性，补充大肠杆菌缺乏的6 种稀有密码子(AUA， AGG， AGA， CUA，CCC， GGA) 对应的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平，该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区（DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶），经pUC19质粒检测转化效率高达10⁸cfu/μg。

操作方法

1. 取100μl冰上融化的Rosetta感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT 或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1. 感受态细胞在冰上融化。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。