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士锋生物杂交瘤细胞的详细介绍和制备过程
点击次数:614 更新时间:2013-11-28

1) 瘤细胞培养(无特殊要求)
骨髓瘤细胞呈悬浮或轻微附着形式生长,如附着性生长的细胞多时,用吸管轻轻吹打或轻轻叩击培养容器即可分离下来。通常要维持细胞于指数生(细胞培养时间为15~20小时),每3~5天取细胞0.2~1ml移入到10ml新培养液中,其zui大细胞密度不能超过5×105~106/ml。一般使用含有高糖的Dmem培养液,并补加有pH的稳定剂HEPES。

2)免疫小鼠和脾细胞的制备
免疫:取6~8周龄Balb/C雌鼠,基础免疫2周,静脉再加强免疫一次,3~5天后用于融合。
脾细胞制备:
1.引颈处死小鼠,用酒精消毒表体。
2.无菌条件下取出脾脏,剃除结缔组织和脂肪,用5ml无血清培养液冲洗一次。
3.把脾脏置于已消毒的90~100目不锈钢网或尼龙纱网中。
4.在脾中部切开一小口,用注射器芯从一端轻轻压挤,再用无血清培养液冲洗,令细胞通过纱网,收集入平皿中,或用注射器向脾脏内注入3 ml无血清培养液,反复抽吸数次方法获取细胞,再制成细胞悬液亦可。
5.把细胞悬液注入50ml离心管中,加10~20ml培养液,轻轻吹打数次,室温中置5分钟。
6.离心(800~1000转/分)计数,备用。

3)饲细胞的制备:常用小鼠胸腺细胞或小鼠的腹腔细胞
小鼠腹腔细胞制备方法:
1.引颈处死小鼠,用酒精消毒表体。
2.切开腹部皮肤剥向两侧,暴露出腹壁。
3.用无菌7号针头注射器,吸取3ml无血清培养液。
4.用小镊夹起腹壁,注入3ml无血清培养液,用手反复轻轻揉腹壁,再反复抽吸3~5次。
5.收集末次吸得的细胞,注入50ml的离心管中,再加20ml无血清培养液,用吸管漂洗一次。
6.离心,去上清,用含血清培养基调节细胞浓度为2×105/ml,接种入培养板中,24孔板每孔加0.1ml。
4)细胞融合
HAT培养基的制备

 

 
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