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士锋生物维生素B2(核黄素)的荧光测定法
点击次数:1419 更新时间:2014-05-05

维生素B2(核黄素)在440~500nm波长光照射下发生黄绿色荧光。在稀溶液中其荧光强度与维生素B2的浓度成正比。利用硅镁吸附剂对维生素B2的吸附作用去除样品中的干扰荧光测定的杂质,然后洗脱维生素B2, 测定其荧光强度。试液再加入连二亚硫酸钠(Na2S2O4),将维生素B2还原为无荧光的物质,再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度,两者之差即为食品中维生素B2所产生的荧光强度。

试剂和器材

一、试剂

0.1 mol/L盐酸; 1 mol/L氢氧化钠; 0.1 mol/L氢氧化钠; 20%(w/v)连二亚硫酸钠溶液; 洗脱液:丙酮+冰醋酸+水(5+2+9); 0.04%溴甲酚绿指示剂; 3%(v/v)溶液; 3%(v/v);2.5mol/L无水乙酸钠溶液;硅镁吸附剂:60~100目,Sigma 公司产品。

10%木瓜蛋白酶:用2.5mol/L乙酸钠溶液配制。使用时现配制。

10%:用2.5mol/L乙酸钠溶液配制。使用时现配制。

维生素B2标准液的配制:

A) 维生素B2标准储备液(25μg/mL):将标准品维生素B2粉状结晶置于真空干燥器中。经过24小时后,准确称取50mg,置于2L容量瓶中,加入2.4mL冰乙酸和1.5mL水。将容量瓶置于温水中摇动,待其溶解,冷却至室温,稀释至2L,移至棕色瓶中,加少许甲苯复盖于溶液表面,于冰箱中保存。

B) 维生素B2标准使用液:吸取2.00mL维生素B2标准储备液,置于50ml棕色容量瓶中,用水稀释至刻度。避光,贮于4℃冰箱,可保存一周。此溶液每毫升相当于1.00μg维生素B2。

二、材料

新鲜猪肝或干黄豆。

三、器材

试管1.5×20cm(×4); 移液管10mL(×1), 1 mL(×2);容量瓶100mL(×1),10mL(×1);高压消毒锅,电热恒温培养箱,维生素B2吸附,荧光分光光度计。

操作方法

一、样品提取

1.水解:称取2~10g样品(约含10~200μg 维生素B2)于100ml三角瓶中,加50mL 0.1mol/L盐酸,搅拌直到颗粒物分散均匀。用40ml瓷坩埚为盖扣住瓶口,于121℃高压水解样品30min。水解液冷却后,滴加1mol/L氢氧化钠,用0.04%溴甲酚绿作外指示剂调至pH为4.5。

2.酶解:含有淀粉的水解液:加入3ml 10%溶液,于37~40℃保温约16h。含高蛋白的水解液:加3ml10%木瓜蛋白酶溶液,于37~40℃约16h。

3.过滤:上述酶解液定容至100ml,过滤。此提取液在4℃冰箱中可保存一周。

 
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