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士锋生物氨基转移反应的定性鉴定
点击次数:658 更新时间:2014-05-20

氨基移换酶也称转氨酶,它能催化α-氨基酸的氨基与α-酮酸的α-酮基互换,这种作用称为氨基移换作用。它在生物体内蛋白质的合成与分解等中间代谢中,在糖、脂肪、蛋白质三类物质代谢的相互、相互转化上都起着很重要的作用。任何一种氨基酸进行转氨作用时,都由其专一的转氨酶催化。它们的zui适pH 接近7.4。在各种转氨酶中,以草酰乙酸转氨酶(简称谷草转氨酶、GOT)及丙酮酸转氨酶(简称谷丙转氨酶、GPT)活力zui强。它们催化的反应如下:


上述两种酶均广泛存在于生物机体中,在正常人血清中也有少量存在。机体发生肝炎、心肌梗塞病变时,血清中转氮酶活力显著增加,在临床上转氨酶活性的测定有重要意义。
测定转氨酶活性的方法很多,如分光光度法,纸上层析法及光电比色法等。本实验利用纸层析法,检查由和丙酮酸在谷丙转氨酶的作用下所生成的,证明组织内氨基移换作用。为了防止丙酮酸被组织中其它酶所氧化或还原,可加碘乙酸或溴乙酸抑制酵解作用或氧化作用。
三、仪器、原料和试剂
仪器
解剖刀、剪及镊子、 解剖盘表面皿、匀浆器、台秤、离心管和离心机(台式)、试管及试管架、恒温水浴、毛细玻璃管、直尺、2H 铅笔、层析滤纸(国产新华1号滤纸)、电热鼓风干燥箱、层析用具:玻璃钟罩、层析缸和小烧杯。针、线、喷雾器。
原料
实验动物家兔
试剂
1. 1/15mol/L 磷酸缓冲液(pH=7.4)
2. 1%溶液(用KOH 中和至中性)
3. 1%丙酮酸溶液(用KOH 中和至中性)
4. 0.1%碳酸氢钾溶液

 
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