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细胞培养常用设备及实验技巧
点击次数:514 更新时间:2014-09-11

常用设备 
准备室的设备: 
单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜(放置未消毒物品)、储品规(放置消毒过的物品)、包装台。 
配液室的设备: 
扭力天平和电子天平(称量药品)、PH计(测量培养用液PH值)、磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液)。 
培养室的设备: 
液氮罐、储品柜(存放杂物)、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱(-80℃)、空调、二氧化碳缸瓶、边台(书写实验记录)。必须放在无菌间的设备:离心机(收集细胞)、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱(孵育培养物)、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱(放置serum和培养用液)。 
无菌操作 
无菌室的灭菌: 
1.定期打扫无菌室:每周打扫一次,先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等,然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5%过氧乙酸擦拭。 
2.CO2孵箱(培养箱)灭菌:先用3‰新洁尔灭擦拭,然后用75%酒精擦拭或者0.5%过氧乙酸,再用紫外灯照射 
3.实验前灭菌:打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟 
4.实验后灭菌:用75%酒精(3‰新洁尔灭)擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。 
实验人员的无菌准备: 
1.肥皂洗手。 
2.穿好、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋 
3.用75%酒精棉球擦净双手。 
无菌操作的演示: 
1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面 
2.靠近酒精灯火焰操作。 
3.器皿使用前必须过火灭菌 
4.继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处,使用时仍要过火。 
5.各种操作要靠近酒精灯,动作要轻、准确,不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。 
6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管,防止交叉污染。 
器械的清洗和消毒 
玻璃器械洗消: 
一、新的玻璃器皿的洗消: 
1.自来水刷洗,除去灰尘。 
2.烘干、泡盐酸:烤箱中烘干,然后再浸入5%中12小时以除去脏物、铅、砷等物。 
3.刷洗、烘干:12小时后立即用自来水冲洗,再用洗涤剂刷洗,自来水冲干净后用烤箱烘干。 
4.泡酸、清洗:用清洁液(重铬酸钾120g:浓硫酸200ml:蒸馏水1000ml)浸泡12小时,然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次,zui后蒸馏水冲洗3-5次和用双蒸水过3次。 
5.烘干、包装:洗干净后先烘干,然后用牛皮纸(油光纸)包装。 
6.高压消毒:包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子,打开开关和安全阀,当蒸气成直线上升时,关闭安全阀,当指针指向15磅时,维持20-30分钟。 
7.高压消毒后烘干 
二、旧的玻璃器皿的洗消: 
1.刷洗、烘干:使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中,泡过来苏尔溶液(洗涤剂)的器皿要用清水刷洗干净,然后烘干。 
2.泡酸、清洗:烘干后泡入清洁液(酸液),12小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗(避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗),再用蒸馏水冲洗3次。 
3.烘干、包装:洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸(油光纸)等包装,以便于消毒储存及防止灰尘和再次被污染。 
4.高压消毒:包装好的器皿装入高压锅内,盖好盖子,打开开关和安全阀,随着温度的上升安全阀冒出蒸气,当蒸气成直线冒出3-5分钟后,关闭安全阀,气压表指数随之上升,当指针指向15磅时,调节电开关维持20-30分钟即可。(玻璃培养瓶消毒前可将胶帽轻轻盖上) 
5.烘干备用:因为高压消毒后器皿会被蒸气打湿,所以要放入烤箱内烘干备用。 
金属器械洗消: 
金属器皿不能泡酸,洗消时可先用洗涤剂刷洗,后用自来水冲干净,然后用75%酒精擦拭,再用自来水,然后用蒸馏水冲洗,再烘干或空气中晾干。放入铝制盒内包装好在高压锅内15磅高压(30分钟)消毒,再烘干备用。

 
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