销售热线:13127537090
 首页 公司简介 新闻中心 产品展示 解决方案 技术资料 客户留言 联系我们 招聘中心
 
公司名称: 上海士锋生物科技有限公司
电  话: 021-56640936
传  真: 021-33250231
联 系 人: 赵先生
手  机: 13127537090
详细地址: 上海市宝山区锦乐路
邮  编: 200064
邮  箱: 1954697015@qq.com
公司网站: www.shifengsw.com

  无标题文档
产品搜索:
 
家兔椎间盘细胞的体外培养方法
点击次数:548 更新时间:2014-10-29

1、培养皿、培养瓶、烧瓶、试管等。

2、分离组织需要的眼科剪子、子。

3、5%CO2孵箱、PH计、95%氧气源。

4、36电动恒温水浴。

5、培养液、各种缓冲液及添加剂DMEM高糖培养基、Hank’s缓冲液 、20%胎牛血清,转换生长因子(TGF-β1)(5ng/mL)、胰岛素-转铁蛋白-硒(10ug/mL胰岛素,5ug/mL转铁蛋白,和0.5ng/mL亚硒酸盐)100U/Ml,100U/ml 。

6、消化液 胶原酶(collagenase) 200U/ml 0.4%台盼兰、0.25

Method 1 组织块法

1、取材:空气栓塞法处死家兔后,在无菌状态下获取家兔椎间盘组织。置于准备好的DMEM培养基(含双抗)。迅速带回到无菌超净台上。(注意事项:椎间盘位于相邻两个椎体之间,取材过程较为繁琐,要求动作迅速,争取在家兔死后半小时内完成,否则,该组织对缺氧耐受性差导致培养失败)。

2、剪切:在超净台上,进一步将周围组织分离,用Hank’s液冲洗数遍,直到冲洗液透明为止。眼科剪刀将组织修剪为1~2cm3大小的小组织块,Hank’s冲洗干净。 加入少量含血清的培养液。(组织块不宜过小,否则不容易爬出足够数量的细胞)

3、接种:用吸管吸取小组织块入培养瓶底部,摆放均匀,一个25cm2的培养瓶可放置10-15个小组织块,翻转培养瓶,加入少量培养液。4~6小时后,待组织块充分贴壁后,再翻转回来(动作一定要轻巧,以免刚刚贴壁的组织块脱离瓶底)

4、置于5%CO2孵箱中培养,每隔3天换液。待细胞95%融合时,0.25传代分瓶。

Method 2 消化法

前面步骤同组织块法1,2。

(3)组织块再进一步剪切,此时培养液中不加血清。完毕后,加入消化液,移入到10ml 离心管,培养箱内消化。每隔20分钟,用吸管吹打一次,观察液体有否变浑浊,并取少量液体,在相差倒置显微镜下观察。0.4%台盼兰染色计算活细胞数目。接种密度在105数量级。置于5%CO2孵箱中培养,每隔3天换液。待细胞95%融合时,0.25传代分瓶

Result: IVD细胞为类软骨细胞,描述:单层细胞形状不规则,可呈三角形、多角形,梭形及不规则形。不同于成纤维细胞

 
上海士锋生物科技有限公司 2008版权所有 电话:021-56640936 传真:021-33250231 联系人:赵先生 地址:上海市宝山区锦乐路
ICP备:沪ICP备12022871号-2 管理登陆 技术支持:环保在线 GoogleSitemap
专业提供:进口elisa试剂盒,标准品,培养基,生物试剂,化工产品。
021-56640936
13127537090
021-33250231
1954697015@qq.com

环保在线

推荐收藏该企业网站