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urkat细胞(人外周血白血病T细胞)的传代
点击次数:1091 更新时间:2014-11-05

urkat细胞(人外周血白血病T细胞),是一种悬浮细胞。我的经验如下:

1、培养液:RPMI1640,15%小牛血清,2%Na2CO3,1%HEPES,100IU/1ml,100IU/ml;

2、培养条件:5%CO2,37度,30%湿度;

3、细胞复苏:要快速将冻存管放入37度水中,不断轻轻摇晃,直到细胞*溶解,加入10ml左右的培养液,800~1000rpm,10分钟离心,之后倒掉液体,加入新的培养基就可以进行培养了;

4、细胞培养:起初进行传代时由于细胞刚刚复苏,长得比较慢,所以可以3~4天传一代,传过两代后,一般2~3天传一代,每次传代后在倒置显微镜下观察细胞形态,在传过几代合适的时候可以进行实验。

5、细胞冻存:1000rpm离心后,弃去液体,加入含有15%DMSO的冻存液,按下列顺序降温:室温→4℃(20分钟〕→冰箱冷冻室(30分钟)→低温冰箱(-80℃ 1小时)→液氮。

6、我在做细胞培养时的一些小经验:

(1)细胞培养箱在每使用1个月用酒精擦洗一次,这样可以减少污染;

(2)虽然说加样器放在紫外下照射会不准,但我们还是丢了一把1ml的加样器在超净台,没有拿出来过,我想这样也许会减少污染;

(3)小牛血清我们用的是国产的,所以在一开始的时候加了15%的小牛血清,但细胞总是长不好,后来摸索条件,把小牛血清的量调到了20%,细胞生长旺盛;

(4)HEPES虽然贵点,但加上去后细胞会长的不错;

(5)在超净台操作前要用0.1%的新洁尔灭或75%酒精擦手。

 
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