实验目的 
1. 学会DNA限制性内切酶酶切技术。 
2. 琼脂糖凝胶电泳法观察酶切DNA的结果。 

实验原理 
质粒pUC118上有限制性内切酶BamHI的识别序列G↓GATCC，用BamHI酶切后形成线性质粒dna。琼脂糖凝胶电泳可以按酶切产物分子量的大小分离DNA片段，小片段比大片段迁移快，凝胶上迁移的距离与分子量的对数成反比。要准确地确定DNA片段的大小，必须用分子量标准物同时进行电泳对照。常用的分子量标准是lDNA/EcoRI、lDNA/HindIII、lDNA/EcoRI+HindIII的酶切片段
DNA的限制性内切酶酶切
DNA的限制性内切酶酶切
实验材料和试剂 
（一）实验材料 
实验二提取的质粒pUC118??? 
（二）试剂 
1．限制性内切酶BamHI 
2．l DNA/HindIII分子量标准 
3．双蒸馏无菌水 
4．溴酚蓝指示剂点样缓冲液 
5．1mg/ml溴化乙锭溶液 
6．电泳缓冲液（TAE） 
7．0.7% 琼脂糖凝胶（用TAE电泳缓冲液配制） 

（三）器材 
1.5ml Eppendorf管 200ml吸头 
（四）仪器 
微量移液器 离心机 
恒温水浴锅 电泳仪 
水平电泳槽 透射紫外观察仪

实验步骤 
1. 取一个灭菌的Eppendorf管，依次加入下列试剂： 
双蒸馏无菌水 12ml 
10×BamHI缓冲液 2ml 
质粒pUC118 5ml 

BamHI 1ml 
总体积 20ml 
2. 用手指轻弹管壁，使各种试剂混匀，快速离心，以集中溶液。 
3. 置37℃水浴60～120 分钟。 
4. 加入5ml溴酚蓝指示剂点样缓冲液，按实验三方法电泳，观察酶切反应结果，鉴定酶切效果。

【提示】
实验操作中注意的问题
1. 酶切反应用的Eppendorf管和吸头，都要用新的，用双蒸馏水洗净，灭菌。使用前打开包装，用镊子夹取，不要直接用手去拿，以防手上的杂酶污染。
2．DNA样品和限制性内切酶的用量都极少，必须严格注意吸样量的准确性及全部放入反应体系中。
3．要注意酶切加样的次序，一般次序为双蒸馏无菌水、缓冲液、DNA各项试剂，zui后才加酶。
4．取酶时，吸头要从酶液的表面吸取，以防止吸头沾上过多的酶液。待用的酶要放在冰浴内，用后盖紧盖子，立即放回-20℃冰箱中，防止酶失活。
5．当样品在37℃保温时，要将Eppendorf管的盖子盖紧，防止因盖子未盖严密使水进入管内，造成实验失败。