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收到细胞株包裹后的细胞活化
点击次数:507 更新时间:2016-10-18

1. 收到细胞株包裹时, 请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形, 若有请立即通知。细胞 
株请尽速开始培养, 或立即冷冻保存(置于–70 °C, 隔夜后, 移到liq N2)。 
2. 冷冻细胞解冻程序: 
2.1. 依据细胞株数据单之基础培养基种类、血清种类和其它之成份和比例, 制备培养基。绝大多数之细胞均无法立即适应不同之基础培养基或不同之血清种类, 若因实验需要, 必须有所不同时, 务必以缓慢比例渐次改变培养基组成, 确定细胞适应后, 方进行所需之实验。 
2.2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 马血清),对细胞而言差异,请务必依据细胞株资料单之血清种类培养之。 
2.3. 将培养基置于37 °C 水槽中回温, 回温后喷以70 % 酒精并擦拭之, 移入无菌操作台内。取出冷冻管, 立即放入37 °C 水槽中快速解冻, 水面高度不可接近或高过冷冻管之盖沿, 否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化后, 以70 % ethanol 擦拭冷冻管外部, 移入无菌操作台内。 
2.4. 依据细胞种类和浓度,于无菌操作台内取10 ml 培养基加至T25 或T75 flask中。取出已解冻之细胞悬浮液,缓缓加入T25 或T75 flask 内之培养基, 混合均匀,放入37 °C,5 % CO2 培养箱培养。 
2.5. 对绝大多数细胞而言,1 % 以下之冷冻保护剂DMSO,不会对细胞之贴附或活化有不良影响,不需立刻由解冻细胞中去除, 待第二天确定细胞生长或贴附良好后再去除即可。惟对极少数因对DMSO 敏感或会造成细胞分化之细胞,需立即去除DMSO 者, 则可将解冻后之细胞悬浮液放入5 - 10 ml 培养基中,离心300 xg (约1000 rpm),5 分钟,小心移去上清液,加入适量新鲜培养基,将细胞均匀混合后, 转移至培养瓶中, 再放入37 °C, 5 % CO2 培养箱培养。 
收到T25 flask 细胞时, 处理方式为︰ 
1. 于寄送过程中,为避免起泡造成细胞脱落死亡,T25 flask 均加满培养基。请检查flask 外观,并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象,若有任何问题, 不要打开盖子,请立即通知细胞实验室。 
2. 将原封之T25 flask 静置于37 °C, 5 % CO2 培养箱中,使细胞回温至37 °C, 并让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。隔天后,于无菌操作箱内取出flask内之培养基,(取出之培养基可以再使用),仅留约5-10ml 培养基于flask 内,依一般培养方式再将细胞置入培养箱中,或细胞已长满盘, 则将细胞做传代培养。

 
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