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大规模培养常用方法
点击次数:599 更新时间:2016-11-13

一、动物细胞生长特性及培养温度 

1.细胞生长缓慢,易污染,培养需用抗生素 
2.细胞大,无细胞壁,机械强度低,环境适应性差 
3.需氧少,不耐受强力通风与搅拌 
4.群体生应,贴壁生长(锚地依赖性) 
5.培养过程产品分布细胞内外,成本高 
6.原代培养细胞一般繁殖50代即退化死亡 

依据在体外培养时对生长基质依赖性差异,动物细胞可分为两类: 

●贴壁依赖型细胞:需要附着于带适量电荷的固体或半固体表面才能生长,大多数动物细胞,包括非淋巴组织细胞和许多异倍体细胞均属于这一类。 

●非贴壁依赖型细胞:无需附着于固相表面即可生长,包括血液、淋巴组织细胞、许多肿瘤细胞及某些转化细胞。 
培养细胞的zui适温度相当于各种细胞或组织取材机体的正常温度。人和哺乳动物细胞培养的zui适温度为35~37℃。偏离这一温度,细胞正常的代谢和生长将会受到影响,甚至死亡。总的来说,培养细胞对低温的耐力比高温高。温度不超过39℃时,细胞代谢强度与温度成正比;细胞培养置于39~40℃环境中1h,即受到一定损伤,但仍能恢复;当温度达43℃以上时,许多细胞将死亡。当温度下降到30~20℃时,细胞代谢降低,因而与培养基之间物质交换减少。首先看到的是细胞形态学的改变以及细胞从基质上脱落下来。当培养物恢复到初始的培养温度时,它们原有的形态和代谢也随之恢复到原有水平。 

二、贴壁培养(attachment culture)是指细胞贴附在一定的固相表面进行的培养。 

1.生长特性:贴壁依赖型细胞在培养时要贴附于培养(瓶)器皿壁上,细胞一经贴壁就迅速铺展,然后开始有丝分裂,并很快进入对数生。一般数天后就铺满培养表面,并形成致密的细胞单层。 

2.贴壁培养的优点: 
●容易更换培养液;细胞紧密黏附于固相表面,可直接倾去旧培养液,清洗后直接加入新培养液。 
●容易采用灌注培养,从而达到提高细胞密度的目的;因细胞固定表面,不需过滤系统。 
●当细胞贴壁于生长基质时,很多细胞将更有效的表达一种产品。 
●同一设备可采用不同的培养液/细胞的比例。 
●适用于所有类型细胞。 

3.贴壁培养的缺点:与悬浮培养法相比 
●扩大培养比较困难,投资大; 
●占地面积大; 
●不能有效监测细胞的生长;

 
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