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DNA显示和细胞有丝分裂相的观察实验
点击次数:416 更新时间:2016-11-21

核酸是生物zui重要的组成成分,核酸分为两大类,即脱氧河塘核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。它们在细胞内的分布及化学性质均有所不同。DNA主要分布在核的染色质或有丝分裂过程中出现的染色体内。RNA分布在细胞质和核仁内。但在染色质及染色体中也含有少量的RNA,核仁中也有少量的DNA。在线粒体,叶绿体等细胞器内除含有RNA外,也含有少量的DNA。 

一、目的与要求 
了解Feulgen反应的基本原理,学习其操作方法和压片法,初步掌握细胞分裂各期的主要特点。 

二、原理 
Feulgen反应的原理是根据DNA经弱酸(1mol/L)水解后,打开料嘌呤和脱氧核糖连接的键,在脱氧核糖的一端形成有离的醛基。这些醛基就在原位与Schiff试剂结合,形成含醌基( )的化合物,醛基是一个发色团所以具有颜色,因此凡有DNA的部位,就呈现紫红色。 

三、实验内容 
1. DNA的显示法-Feulgen反应 
2. 压片法 
3. 细胞有丝分裂相的观察 

四、 实验步骤 
(一) DNA的显示法-Feulgen反应 
以蚕豆根尖或洋葱根尖为材料,进行Feulgen反应的具体操作程序如下: 

切取根尖 
↓ 长度0.3-0.5cm 

Camoy固定剂 
↓ 固定10-30分钟 

95%酒精 
↓ 10分钟 

70%酒精 
↓ 10分钟 

蒸馏水 →(对照) 5%三氯醋酸 
↓ ↓90oC 15分钟 
1mol/L HCl ← 蒸馏水 
↓ 室温 

1mol/L HCl 
↓ 60 oC 8分钟 
Schiff试剂 
↓ 40 -60分钟 

亚硫酸水(1,2,3) 
↓ 换3次,每次5分钟 

自来水 
↓ 将染色后的根尖漂洗干净,悬着染色效果好的材料 

蒸馏水 
↓ 

压片 
↓ 

镜检

 
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