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银染核仁形成区与近端着丝粒染色体随体联合
点击次数:932 更新时间:2017-04-05

【实验原理】
人类近端着丝粒染色体的副缢痕与核仁形成有关,故称为核仁形成区(NOR)。当位于此处的18S、28S核糖体RNA的基因(rDNA)具有转录活性时,应用银染技术可使NOR特异性着色(褐黑色)。进一步证明银染物质不是rDNA,亦不是rRNA,可能是核仁形成区特异的蛋白质,即和rRNA转录相的酸性蛋白。人类核糖体RNA基因位于5对近端着丝点染色体短臂的次猛痕处,即人类的核仁形成区。在正常人中, 不是所有核仁形成区均被银染,其范围大约4-10。应用银染法可以觉察正常人体核糖体RNA基因的活动。此外,人类近端着丝粒染色体的随体间易发生联合,应用银染技术可在发生联合的染色体间清楚地看到银染物质相连。因此,应用银染核仁形成区(Ag-NOR)与近端着丝粒染色体随体联合(Ag-AA)技术,可以分析有活性的rRNA基因的动态变化。正常人Ag-NOR平均为5.8/细胞。

【实验用品】
1. 恒温水浴箱、显微镜、平皿、牙签、擦镜纸、镊子;
2. 预制染色体玻片标本、0.1%甲酸、AgNO3(50%)。1:20 Giemsa,5mol/L HCl。

【实验步骤】
1. 按半微量法采取外周静脉血,接种培养。常规法制片。将染色体玻片标本在室温下放置2~3天。
2. 将标本置入5mol/L HCl溶液中常温处理5分钟,蒸馏水冲洗2-3次,甩干。
3. 将500mg AgNO3溶于1 ml 0.1%甲酸溶液中,混匀后立即滴4~5(5ml)滴至玻片标本上。
4. 在平皿中平行放置两根牙签,将玻片标本放在牙签上。
5. 在标本上盖一张比玻片稍小的擦镜纸,用镊子掀动纸片数次,使染液均匀分散在标本上。
6. 将平皿置于60℃水浴箱中处理3-5分钟,直至擦镜纸呈棕黄色终止反应。
7. 蒸馏水冲洗去擦镜纸,以1:20 Giemsa染液复染3分钟。水洗,气干。
8. 镜下观察。

【实验结果与分析】
1. Ag-NOR的计数:选择银染着色清晰的分裂相,计数6个D组(13、14、和15号染色体)和4个G组(21和22号染色体)近端着丝粒染色体,不论单侧或双侧的银染点都计数为一个有银染的染色体。
2. Ag-AA计数:凡近端着丝粒染色体之间有银染物质相连的,均计数为Ag-AA。涉及2条近端着丝粒染色体的联合,记为1个Ag-AA;涉及3条近端着丝粒染色体的联合,如未形成闭环的,记为2个Ag-AA;3条染色体联合形成闭环时,记为3个Ag-AA;依此类推。
银染核仁形成区与近端着丝粒染色体随体联合

 
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